实时荧光定量PCR仪:揭秘核酸检测关键设备
PCR检测RNA需要的仪器及试剂
PCR(聚合酶链式反应)是一种重要的分子生物学技术,广泛应用于基因扩增、突变分析、病原体检测等领域。其中,PCR检测RNA是非常常见的一种应用。本文将介绍PCR检测RNA所需要的仪器和试剂。
## 仪器
1. PCR仪:PCR仪是进行PCR实验的核心设备,能够控制温度、循环次数等参数,实现对PCR反应过程的精确控制。市场上有很多不同品牌的PCR仪可供选择,如Qiagen、Applied Biosystems、FastStart Essential DNA Green Master Mix等。
2. 凝胶成像系统:凝胶成像系统用于观察PCR扩增产物的电泳结果,可以记录和分析PCR产物的大小、数量等信息。市场上有多种类型的凝胶成像系统,如Bio-Rad、MJ Research等。
3. 实时荧光定量PCR仪:实时荧光定量PCR仪具有更高的灵敏度和特异性,可以在扩增过程中实时监测荧光信号的变化,从而实现对目标DNA浓度的精确测量。如罗氏诊断的RealTime PCR System。
4. 低温冰箱:低温冰箱主要用于保存PCR反应所需的试剂,如引物、探针、模板等。一般要求储存温度为-20℃。如Thermo Scientific的Vivant Frost Plus。
## 试剂
1. RNA提取试剂:RNA提取试剂用于从样本中提取RNA,常用的有Qiagen的RNeasy Mini Kit、Zymo Research的ZR-96 RNA Minipreps等。
2. DNase I:DNase I是一种内切酶,可以降解DNA,避免DNA污染,常用于提取RNA前去除DNA干扰。Qiagen的DNase Set、Invitrogen的DNase Set等。
3. Oligonucleotide Primers:Oligonucleotide Primers是PCR扩增的关键因素,用于与目标序列结合,启动扩增反应。常用的有Qiagen的Assay on Target Wizard、Applied Biosystems的Primer Assay等。
4. Taq酶:Taq酶是PCR反应中的耐热DNA聚合酶,能够在高温条件下保持活性,完成扩增反应。常见的有Promega的Protaq Gold、Fermentas的High Fidelity Taq polymerase等。
5. SYBR Green Master Mix:SYBR Green Master Mix是一种荧光染料混合物,用于实时荧光定量PCR反应,可以检测扩增产物的数量。Qiagen的SYBR Green Master Mix、Applied Biosystems的Fast Advanced Master Mix等。
综上所述,PCR检测RNA需要使用到PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、低温冰箱以及相应的RNA提取试剂、DNase I、Oligonucleotide Primers、Taq酶和SYBR Green Master Mix等试剂。这些设备和试剂共同构成了PCR检测RNA的基本实验流程。